抗體驗證策略:獨立抗體驗證(Independent antibody strategies)

 

國際抗體驗證工作組(IWGAV)于 2016 年 9 月份出臺了一套抗體驗證指南并發表在《Nature Methods》雜志上, 題為「A Proposal for Validation of Antibodies」, 強調了抗體驗證需要針對應用和背景來開展。文章提出了五大“支柱策略”指導抗體特異性驗證,即基因策略、正交策略、獨立抗體策略、表達標記蛋白、免疫捕獲&MS。

 

獨立抗體策略是其中一種,即利用兩種靶向同一蛋白靶標的獨立抗體,可作為檢測抗體特異性的有用工具。理想情境下,所用的兩種或多種抗體靶向抗原的不重疊表位。通過獲取識別同一靶標蛋白的獨立區域的抗體結果,可提高抗體具有特異性、適于檢測預定靶標結論的可信度。

 

以下實例展示了使用獨立抗體驗證靶向特異性的操作方法。

我們采用三種獨立的NF-kappaB p65 Antibody(ab4,ab5,ab6)分析來自大鼠腦組織,小鼠腦組織,293細胞的提取物的P65表達。三種抗體的免疫原來自人的NF-kappaB p65蛋白的不同表位。種屬反應性以及質譜分析結果的差異,表明這些抗體具有明顯差異的靶標結合曲線,適于進行特異性確認。對比wb結果表明ab4在三種樣本中均檢測出條帶,ab5在人、大鼠中檢測到較弱條帶,ab6在293中檢測到條帶。3種抗體在不同樣本中分別表現出相似的條帶區域,且條帶位置與預測一致,印證了該抗體能夠特異性識別P65蛋白。因ab4在三種樣本中都檢測到明顯主帶,因此我們選擇ab4作為最優的p65抗體。對應產品:NF-kappaB p65 Antibody,貨號:AF5006。




 

 

 

種抗體在檢測人、小鼠和大鼠p65蛋白時表現出了良好的相關性。

 

通過獨立抗體驗證的 Affinity 抗體在搜索結果及相關產品頁面上會顯示獨立抗體驗證標識

 

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